Comédien, réalisateur, metteur en scène et dramaturge Guillaume Gallienne devient pensionnaire de la Comédie Française en 1998 et en 2005, le 513^e sociétaire.

En 2006, il alterne entre le Théâtre Nô Tessenkaï de Tokyo, l’Opéra de Paris et le Bolchoï de Moscou, mettant en scène respectivement Huis Clos de Jean-Paul Sartre, les ballets Caligula de Nicolas Le Riche et Illusions perdues d’Alexeï Ratmansky. En 2007, Il met en scène Sur la grand-route d’Anton Tchekhov au Studio-Théâtre de la Comédie-Française.

De 2008 à 2010, il crée Les Bonus de Guillaume, plus de 200 sketches pour Le Grand Journal sur Canal Plus. En 2009, il crée une émission de lectures sur France Inter, Ça peut pas faire de mal, qu’il animera pendant onze ans.

Sa pièce Les Garçons et Guillaume, à table ! connaît un grand succès et lui vaut le Molière de la révélation théâtrale. Trois ans plus tard, il adapte la pièce pour le grand écran. Le film, acclamé par la critique, est un succès et est récompensé par 5 César, dont celui du meilleur acteur et du meilleur film.

A la Comédie-Française il incarne Oblomov de Gontcharov, mis en scène par Volodia Serre, qu’il réalisera en téléfilm pour Arte en 2015, puis Lucrèce Borgia de Victor Hugo mise en scène par Denis Podalydès, et joue pour Ivo van Hove dans Les Damnés d’après Luchino Visconti.

Au cinéma, son interprétation de Pierre Bergé dans Yves Saint Laurent de Jalil Lespert lui vaut une nomination aux César 2015. L’année suivante, il partage l’affiche avec Adèle Exarchopoulos dans Eperdument de Pierre Godeau ainsi qu’avec Guillaume Canet dans Cézanne et Moi de Danièle Thompson.

En 2017, il réalise à la fois son deuxième film, Maryline, et met en scène la Cenerentola de Rossini à l’Opéra National de Paris

Il écrit et assure la dramaturgie du ballet Of love and rage pour Alexei Ratmansky à l’American Ballet Theater, puis pour le Met.

En 2023 il joue St Just dans La Mort de Danton et tourne une mini-série réalisée par Stephen Frears dans laquelle il joue le mari de Kate Winslet intitulée The Regime et tourne Tartuffe, qu’il incarne, dans une mise en scène d’Ivo Van Hove. Il est depuis cinq ans Le Malade Imaginaire dans la mise en scène de Claude Stratz et travaille également sur une série intitulée La Recherche, adaptation libre de l’œuvre de Marcel Proust et réalise l’adaptation de Cyrano de Bergerac en film d’animation avec des animaux.

A l’opéra, il met en scène Pulcinella de Stravinsky et L’Heure Espagnole de Ravel à l’Opera Comique repris à l’Opéra National d’Estonie en Février 2025.

Guillaume Gallienne a enseigné le théâtre aux cours Florent et au CNSAD, mais aussi à Princeton University.